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肺炎支原体可从咳痰或咽拭子中培养出来，但分离和鉴定需7~10天，但许多医院的实验室无法作此项检查。痰革兰氏染色见少量细菌，多形核白细胞，巨噬细胞以及大块脱落的呼吸道上皮细胞。胸部X线改变多种多样，但最常见的是两肺下叶片状支气管肺炎，大叶性实变和胸腔积液不多见。周围血白细胞一般正常或有轻度增多。冷凝集反应如连续有滴度升高4倍者或一次滴定效价≥1:64，一般认为是阳性。但只有50%~75%的病人呈阳性，并不绝对可靠。最实用的是采用血清学检测(最常用的标准是IgM单独升高，或滴度有4倍升高且在症状出现2~4周之后出现滴度高峰(≥1:64)。
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